1.包被抗体或抗原不适,易产生阳性值较小,或产生变异,即跳管现象。
2.用抗血清不纯化,或纯化程度太低的抗体包被,则阳性值较小,或没有阳性梯度。
3.封闭不好或标记物过浓可产生对照值较高。
制备并鉴定抗t-2毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株,以期为t-2毒素的快速检测提供有力的抗体工具。方法:采用琥珀酸酐法将t-2毒素活化为t-2hs,t-2hs在dcc与nhs作用下与牛血清白蛋白(bsa)或卵清白蛋白(ova)偶联合成*抗原。以t-2hs-bsa为抗原,免疫balb/c小鼠,用elisa筛选、建立分泌抗t-2毒素抗体的杂交瘤细胞株。测定单抗免疫球蛋白亚类及单抗效价,用间接竞争法检测单克隆抗体细胞株的特异性。结果:建立了1株稳定分泌抗t-2毒素抗体的杂交瘤细胞株t-1b3,该细胞株所分泌的单隆抗体ig亚类为igg1,elisa检测结果表明抗t-2毒素抗体可以与t-2毒素发生特异性反应,工作浓度为1:6.5×104,ic50为3.6ng/ml。该抗体与ht-2毒素的交叉反应为65.9%,与黄曲霉毒素无交叉。结论:制备出能分泌具有较高特异性和亲和力的抗t-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
